96孔板 大腸桿菌蛋白提取實(shí)驗(yàn)

大腸桿菌蛋白的表達(dá)涉及到蛋白的可溶性，對(duì)于疏水性蛋白來(lái)說(shuō)后期處理比較麻煩，因?yàn)榈鞍走^(guò)完Ni柱之后涉及到咪唑的處理，現(xiàn)在傳統(tǒng)的工藝就是透析或者加疏水柱，但是透析容易出現(xiàn)蛋白凝集，產(chǎn)生大量沉淀，損失量高，導(dǎo)致目標(biāo)蛋白的產(chǎn)量降低，蛋白活性低，耗時(shí)時(shí)間長(zhǎng)；而加疏水柱后期洗脫會(huì)加入大量的氯化鈉，高鹽對(duì)于后期實(shí)驗(yàn)有影響，所以這兩種方法對(duì)于有些疏水性強(qiáng)的蛋白來(lái)說(shuō)很不合適。更重要的是，目前均采用單標(biāo)簽的方式，而像GST標(biāo)簽等均為蛋白類物質(zhì)，因此體系中同時(shí)會(huì)存在相應(yīng)標(biāo)簽的游離的雜蛋白，導(dǎo)致除去困難或無(wú)法除去等，致使蛋白質(zhì)純度降低，且后處理工藝復(fù)雜。

此外，對(duì)于大腸桿菌破碎而言，傳統(tǒng)的大腸桿菌破碎工藝為超聲破碎和高壓勻漿；高壓勻漿儀價(jià)格昂貴，而且儀器出故障的概率高，維修費(fèi)用高。超聲破碎的方法缺點(diǎn)很多，比如由于超聲會(huì)產(chǎn)生持續(xù)的熱量，這樣會(huì)降低蛋白的活性，還破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，造成蛋白量的損失。還有就是超聲破碎對(duì)體積有要求，體積不能過(guò)大，體積過(guò)大，超聲時(shí)間越長(zhǎng)，產(chǎn)生的熱量也會(huì)增加，對(duì)蛋白影響會(huì)更嚴(yán)重，

非接觸超聲打斷儀，適合處理高通量樣品，同時(shí)低溫控制超聲熱量對(duì)樣品的影響，消除了樣品交叉污染的危險(xiǎn)；能隔著離心管能打斷染色體、破碎細(xì)胞。

研究方向：

96孔板 大腸桿菌蛋白提取實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、準(zhǔn)備96孔PCR板預(yù)制好大腸桿菌密封；

2、超聲總時(shí)間30min，超30s，停10s

3，顯微鏡鏡檢破碎效果 如圖

實(shí)驗(yàn)解決的問(wèn)題：

1、儀器多通道相對(duì)于手工單通道超聲工作時(shí)更省力方便，實(shí)驗(yàn)更安全；

2、控溫制冷對(duì)樣品保護(hù)好，提取出的成分在數(shù)量和質(zhì)量上比手工超聲均質(zhì)效果更好；

3、不會(huì)出現(xiàn)交叉感染，實(shí)驗(yàn)更省心

破碎前大腸桿菌

破碎后

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